本文標(biāo)題："植物染色制備方法-植物細(xì)胞觀察實驗顯微鏡"
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植物染色制備方法-植物細(xì)胞觀察實驗顯微鏡
染色體制備
制備的染色體應(yīng)除凈細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞壁碎片；因為這兩者都能夠
非特異地與探針和檢測試劑結(jié)合而產(chǎn)生背景信號。我們建議使用鉻
酸清洗過的載玻片制備染色體，因為污物和油脂也會產(chǎn)生背景信號
。植物染色體制備方法，連同鉻酸清洗載玻片的方法，
使用多線染色體能夠提高檢測的靈敏度。多線染色體是因核內(nèi)
重復(fù)循環(huán)倍增而產(chǎn)生的，每個染色單體都產(chǎn)生很多相同的拷貝。多
拷貝就意謂著一個低拷貝序列重復(fù)出現(xiàn)了很多次。在果蠅中多線染
色體己經(jīng)用于低拷貝序列的定位研究中了(例如Whiting等1989)。
在植物方面，人們已通過6H將重復(fù)序列定位于多線染色體上。，但
是還沒有人把多線染色體用于定位低拷貝序列。
高分裂中期指數(shù)
通常低拷貝序列的檢測成功率很低，因此增加每個載玻片上中
期細(xì)胞的數(shù)目可以提高成功的機會。在植物中累積中期的方法將在
ISH使用的很多探針是通過含有目的DNA序列及載體DNA的質(zhì)粒
克隆制備的。為了減低背景，應(yīng)該僅用目的序列作為探針，因為載
體序列能夠非特異地結(jié)合靶DNA(染色體DNA)而使背景增加。粘粒和
酵母人工染色體(YACs)能夠容納1 Mb的DNA，正越來越多地用于動
物的低拷貝序列的定位，，但在植物中它們的潛力尚未得到發(fā)揮。
由于粘粒和YACs的插入很大，因此這種探針還含有很多重復(fù)DNA序
列。可以通過在雜交混合液中加入封閉DNA來抑制這些探針與靶DNA
的雜交。
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